無外泌體胎牛血清的制備和應用

　　無外泌體胎牛血清的制備和應用

　　無外泌體胎牛血清適用外泌體研究，無支原體，無內毒素。胎牛血清（Fetal Bovine Serum, FBS）是大多數細胞培養重要的生長支持物。天然來源的FBS會含有大量的外泌體（exosome）等囊泡（Extracellular Vesicles）成分。由于FBS來源的外泌體會對研究結果產生巨大干擾，因此，外泌體研究時必須使用去除外泌體后的FBS進行細胞培養。

　　細胞在正常含血清的培養基中培養一定的時間后，細胞融合度約為 60%-70%時，移去原有含血清的培養基，換成新鮮的無外泌體胎牛血清，繼續培養 48h 左右，細胞融合度達到80%-95%左右時收取上清,該上清液即可用于提取外泌體。

　　制備

　　無外泌體胎牛血清的制備：用0.22um的濾膜過濾胎牛血清，濾液置于超高速離心管中，4℃，120000g超高速離心90min，收集上清液。

　　應用

　　無外泌體胎牛血清可用于犬MSC來源外泌體的分離：用10％無外泌體胎牛血清、1％雙抗、1％L-谷氨酰胺和88％DMEM基礎培養基配制*培養基，以制得的*培養基傳代培養MSC，取第3-5代收集上清在4℃，300g離心10min除去死細胞；收集上清后在4℃，16500g離心20min除去細胞碎片；收集上清后用0.22um的濾膜過濾；收集上清后在4℃，120000g超高速離心90min；去上清后，用生理鹽水重懸沉淀，再次以4℃，120000g超高速離心90min；去上清后，用生理鹽水重懸沉淀，收集懸液即為犬MSC外泌體制劑。